Lab Notes - Quiz 1.docx

4 Pages
357 Views
Unlock Document

Department
Microbiology (Biological Sciences)
Course
MICRB265
Professor
Yan Boucher
Semester
Winter

Description
Safety ­ We use organisms at concentrations of 10^5 to 10^8/mL Bacteria may be pathogenic at these  concentrations. ­ If spill, notify TA – wash hands with soap and water & cover spilled area with paper towel and  flood with disinfectant. Discard of Lab Materials  (Part of aseptic technique to prevent contamination of the lab, the people, cultures, and sterile media) ­ Biologically contaminated paper towels ­> autoclave bucket ­ Chemicals, reagents, agar, cultures ­> container at the front ­ Used microscope slides ­> metal trays at bench, later collected into waste bucket at front (NOT  autoclave) ­ Used pipettes ­> placed tip down into plastic beaker on student bench ­ Used Pasteur pipettes/spreaders ­> marked container, spreaders are reused, pipettes are discarded ­ Contaminated glassware ­> metal trays at the front ­ Used tubes ­> angled wire baskets at the front (plastic for non­contaminated, metal for  contaminated). Keep caps on but remove tape/writing. ­ Used Petri dishes ­> autoclave bucket Autoclave:  Petri dishes and contaminated paper towels. Angled basket (front):  Non­contaminated tubes in plastic, contaminated tubes  in metal (with lid) Leave on bench: Used pipettes, tip down (beaker) and collection of  microscope slides, temporarily (metal tray) Metal trays (front): Contaminated glassware Waste bucket (front): Chemicals, reagents, agar, cultures, used microscope  slides Container (front):Pasteur pipettes (to be discarded) and spreaders (to be  reused) Exercise 1: Colony and Cell Morphology of some Bacteria Colony Morphology: viewed on a culture plate (TCS/TSA Trypticase Soy Agar) with the naked eye. First  step in identifying unknown bacteria. Form, margin, surface, transparency, color.  ­ Escherichia coli, Enterobacter aerogenes, Proteus vulgaris:  circular, undulate, smooth, opaque, white ­ Enterococcus faecalis (white), Staphylococcus aureus (orange/golden), Staphylococcus  epidermidis (white): punctiform, entire, smooth, opaque Cell Morphology: viewed under microscope at 1000X. Cells need to be dried, heat­fixed to a slide and  dyed. Shape of cells, but also gram stain reaction, relative size, and cell arrangement. ­ Escherichia coli, Enterobacter aerogenes, Proteus vulgaris: singular bacillus (found paired up, clustered, in chains), gram negative ­ Enterococcus faecalis, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermis: singular coccus (only chains during cell division), gram positive  Microscopy ­ Resolution/resolving power: determines the ability to show detail, to show that two points are  separate. Determined by objective lens (numerical aperture) and the wavelength of light used.  Resolving power = wavelength of light/ (2 x NA) ­ Visible light = 500­600 nm.  ­ Improve resolving power by using an objective lens with a bigger NA. ­ Immersing the objective lens in oil increases its NA (due to its high refractive index) ­> increasing  its resolving power. Max. resolution of oil lens is 0.2 micrometers. ­ Magnification is independent of resolving power, but needed to enlarge resolved image. Usually,  lenses with high NA will have high magnification. ­ Empty magnification: magnification that makes an object easier to see but doesn’t increase it’s  detail ­ Condenser lens system: focuses light used on the specimen. Contains the iris diaphragm, which  adjusts the size of the circle of light to prevent glare or loss of clarity. Light can separately be  turned down. PHASE CONTRAST MICROSCOPE: relies on differential diffraction (refraction of light), its different  component parts, and the suspending medium. All the light passing through medium is in phase, but the  light passing through the organism is not (looks darker) o Proteus vulgaris o No need for dyes & organisms don’t die ELECTRON MICROSCOPE: uses beam of electrons rather than light (smaller wavelength) therefore  better resolution. TEM – examine thin slices of cells to visualize internal structures. SEM – examine the  surfaces of intact specimens. Electron scattering uses a thin layer of gold. o High resolution  Simple staining: all cells get stained (ex. Crystal violet) Differential staining: different cell types or different cell components are stained differently ­ Gram stain: stains according to differences in cell wall. Gram + (thicker cell wall = purple and  not decolorized by ethanol) vs. Gram – (outer membrane, thinner cell wall = decolorized and must  be counterstained red) ­ Acid Fast stain: Cell wall contains waxy lipids (mycolic acids) that are impermeable to  chemicals/dyes and prevent bacteria from drying out. Once the red stain called carbolfuchin  penetrates the cell wall, it cannot be removed with acidified organic solvents, so it’s called “acid  fast”. Non­acid fast bacteria lose the red color when washed and are counterstained blue. o Mycobacterium spp. (Gram positive, non­motile rods) are acid fast. ­ Schaeffer­Fulton stain: Endospores are resistant to many chemicals. Malachite green is forced  into the spore using steam. Because it is water soluble, vegetative cells and mother cells are  decolorized with water and counterstained red. So spores = bright green, vegetative cells =  brownish/red, and mature endospores = red cells with green interior. o Bacillus and Clostridium ­ Flagella stain: Too thin to be seen by light microscopy. Use a deposition stain – precipitate  accumulates around the flagellum to increase its apparent diameter and make it visible. Should be  able to determine arrangement (polar, sub­polar, monotrichous, lophotrichous, amphitrichous,  peritrichous) ­ Ca
More Less

Related notes for MICRB265

Log In


OR

Join OneClass

Access over 10 million pages of study
documents for 1.3 million courses.

Sign up

Join to view


OR

By registering, I agree to the Terms and Privacy Policies
Already have an account?
Just a few more details

So we can recommend you notes for your school.

Reset Password

Please enter below the email address you registered with and we will send you a link to reset your password.

Add your courses

Get notes from the top students in your class.


Submit