Class Notes (839,328)
United States (325,924)
Biology (637)
BIOL 2324 (9)
Lecture

Lab 1- Isolation of Chromatin from Plant and Animal Tissue.docx

5 Pages
267 Views

Department
Biology
Course Code
BIOL 2324
Professor
Thomas Manning

This preview shows pages 1 and half of page 2. Sign up to view the full 5 pages of the document.
Description
Isolation of Chromatin from Plant and Animal Tissue Melissa Johnson Manasa Madasu Mon 2:50 Methods/Results/Discussion Plant Tissue The purpose of this experiment was to separate chromatin from plant tissue.   Strawberries were selected because of the unique fact that they contain eight copies of  each chromosome, increasing the amount of DNA that can be isolated from a few  strawberries.  By using frozen strawberries instead of fresh, we were able to more easily  break down the cellulose in the cell wall.  We mashed defrosted strawberries into a  smooth pulp with a mortar and pestle.  This was done to lyse the individual cells and  release the cytoplasm and nuclear envelope .   The pulp was deep red, and very thick.   The main components in the pulp were the skin of the strawberry, made up of cell walls,  cellular membranes, cellulose, and cellular debris.  We transferred the pulp to a beaker  and added 10 eyedroppers full of warm salt water/detergent solution and filtered this  solution through a coffee filter.  By adding the detergent/salt solution, we disrupted the  lipid bilayer of the cellular membrane and nuclear envelope, releasing the DNA and  4 denatured the proteins associated with it .  The detergent forms micelles with lipid  molecules form the cellular membrane and the salt denatures the proteins associated with  the DNA, releasing it.  The filtered solution was thin, a lighter color red and contained no  pulp.  The main components of the filtered liquid are water, DNA and other intra­cellular  material .  We added ice­cold ethanol to the filtered solution to a concentration of 95%.   Ice­cold ethanol is used because it increases the yield of DNA extracted.  The cold  ethanol slows down the activity of DNAses in the cytoplasm once the detergent disrupts  the nuclear membrane.  Also, DNA is soluble in water because the polar water molecules  diminish the force of the negatively charged backbone of DNA.  The ice­cold ethanol  reduces this effect of the polar water molecules, allowing the DNA to form ionic bonds  with the positively charged NA+ ions in the water from the salt, thus precipitating out of  4 the aqueous solution .  The chromatin that separated from the filtered solution was a light  white, bubbly, cloudy, stringy material that separated in the ethanol layer just above the  red strawberry solution.  We then took out the separated chromatin and heated it in a  separate test tube.  The chromatin after heating looked white, dried out, and on the very  bottom burnt to a brownish color.  This suggests that heating the DNA caused  denaturation.  Most likely, the hydrogen bonds between strands were broken, the tertiary  and quarternary structure compromised, causing the chromatin to unravel and the bonds  to break 1,2.7 Animal Tissue The purpose of this experiment was to separate chromatin from animal tissue.   Goat liver was prepared by blending in a blender with EDTA­Saline.  EDTA is  Ethylenediaminetetraacetic acid.  The EDTA is used as a buffering solution.  The purpose  of the EDTA­Saline solution was to chelate Mg++ ions and prevent DNAse enzymes  from working that would otherwise break down the DNA.  Thus, allowing the DNA to be  extracted as complete strands. This mixture was filtered and the filtered solution was  centrifuged.  The liquid was salmon­colored, cloudy, and fairly runny, containing mostly  water.  The pellet on the bottom was very thick and a dark sand color, containing cells,  cellular debris and DNA .  We took this centrifuged liquid, poured out the 43ml of  supernatant, and resuspended the pellet in 43ml of EDTA­saline.  We then centrifuged  this mixture again and discarded the supernatant.  The supernatant was light brown in  color and very watery.  The pellet on the bottom was a lighter sand color and again very  thick.  We then added 40 ml of 2.6M sodium chloride to the pellet that was leftover after  centrifugation and resuspended the pellet by stirring gently.  The NaCl was used to  denature the proteins associated with DNA to disolve the DNA.  The polar nature of NaCl  will readily dissolve DNA .  Most of the pellet resuspended in the mixture but some  floated on top and looked like droplets of brown oil.  We shook this mixture in a shaker at  room temperature for ten minutes to dissolve the chromatin and then centrifuged it again  to remove the undissolved DNA.  We then added ice cold 95% ethanol to the supernatant  to a concentration of 70%.  A concentration of 70% ethanol was used because it is high  enough to precipitate out the DNA while still not affecting the solubility of the proteins in  the supernatant.  The DNA precipitated on the top of the solution as a white spongy  1,2 material that made a thin film on top of the solution
More Less
Unlock Document

Only pages 1 and half of page 2 are available for preview. Some parts have been intentionally blurred.

Unlock Document
You're Reading a Preview

Unlock to view full version

Unlock Document

Log In


OR

Join OneClass

Access over 10 million pages of study
documents for 1.3 million courses.

Sign up

Join to view


OR

By registering, I agree to the Terms and Privacy Policies
Already have an account?
Just a few more details

So we can recommend you notes for your school.

Reset Password

Please enter below the email address you registered with and we will send you a link to reset your password.

Add your courses

Get notes from the top students in your class.


Submit