Study Guides (248,412)
Canada (121,517)
Psychology (623)
PSYCH 101 (177)
n.a (8)
Final

Biology 241 Lab Exam Notes.docx

19 Pages
303 Views
Unlock Document

Department
Psychology
Course
PSYCH 101
Professor
n.a
Semester
Summer

Description
Experiment 1: Direct Microscopic Count of Mircroorganisms in Milk • Different kinds of microorganisms present in milk (depending on source and  circumstances) • Gram­positive, nonmotile, microaerophilic, or anaerobic rods and cones • Lactobacillus, Micrococcus, and Streptococcus • Advantages of Microscopic Count:  o Results are readily available o Individual bacteria and clumps can be counted o Minimum of equipment is required o Morphology of bacteria can be detected o Slides can be kept as permanent record • Disadvantages of Microscopic Count: o Cannot differentiate between alive and dead bacteria o Count not accurate on low­count milk o Tiring o Cells difficult to discern, extraneous material (debris) may cause confusion Methods and Materials • Used raw milk (unpasteurized), pasteurized milk, pasteurized milk after best before date o Most microorganisms will most likely be found in the last one (raw milk is fairly  clean) • Vortex: to evenly mix the samples • Steam­fix: dry the slide over the beaker of boiling water • SlideBrite: removes the fat globules • Warm water removes ethanol, ethanol removes the SlideBrite • Stain with methyl blue, decolorize with ethanol, stop decolorization with water Microscope Factor (MF) • Measure the diameter (0.01mm) = each small space • Diameter/2 = radius • Use formula Area of Field = (pie)(r) 2 • Convert to centimetres = /100 • Number of fields in 1cm = 1cm  / area of field in cm 2 • Microscope Factor = Number of fields/0.005ml/cm Microorganisms only found in past­date pasteurized Experiment 2: Standard Plate Count of Milk • Agar­plate method for estimated bacterial populations • Official method for determining the sanitary quality of milk – most widely used • Serial dilutions of sample is prepared and are either o spread over surface of an agar growth medium: spread­plate technique o mixed with molten­agar growth medium: pour­plate technique • Colony = arisen from the multiplication of an individual bacterial cell fixed in place in  medium  • Total number of colonies formed is equivalent to number of viable microorganisms • Number of bacteria in original sample can be determined by counting # of colonies and  accounting for dilution factor obtained which will produce separate and distinct colonies  for counting • Advantages o it counts only viable microorganisms o accurate for use with milk having a low bacterial count • Disadvantages o detects only organisms capable of utilizing particular nutrients supplied o colonies that are derived can be from a single cell or clumps of cells • Only provides an estimate of total population present in the sample Materials and Method: ­2 • 1.0mL of sample A into 99mL of water = 10  dilution  • 1.0mL of 10 into 99mL sample = 10 dilution • 0.1mL of 10 into petri dish  • Incubated at 37⁰C for 48h Results: • Use Quebec colony counter (bottom of plate facing you)  • Standard Plate Count: plates that yield a colony count between 25­250 • Number of microorganisms per mL of sample = (# of colonies) x (inverse of dilution) =  CFU/mL) More colonies were found in the sample of raw milk than in pasteurized milk  Experiment 3: Microbiological Analysis of Cheese • Cheese is the result of metabolic activity of microorganisms • Lactic acid­producing bacteria (Streptococcus and Lactobacillus) initiate the process o The organic acids produced (lactic acid) is responsible for acidification of the  milk • Other microorganism added ▯ their enzymes cause protein molecules to separate from   mixture (curd) – the curd becomes cheese after some further processing • Three kinds of cheeses:  o Soft ▯ acid­curd cheeses o Hard ▯ rennet­curd cheeses o Semisoft ▯ rennet­curd cheeses • Defect:  o formation of gas due to the presence of gas­producing organisms such as  Clostridium and/or coliform bacteria such as Eshcerichia coli and  Enterobacter aerogenes  o Spoilage : due to dairy mold (Geotrichum, Cladosporium, Penicillium • Purpose: To numerate and differentiate microorgansims found in cheese that cause  spoilage Materials and Method:  • Used alcohol flamed forceps  • 1mL of cheese sample placed in 99mL of water and sterile sand = 10  dilution  ­2 ­4 • 0.1mL of 10  dilution into 9.9mL will give you a 10  dilution  • All Purpose Tween Agar  (APT) ▯ permits the growth of “lactic acid”  o Streptococcus and Lactobacillus o Non­selective  o Incubated at 30⁰C for 24­48h • Eosin Methylene Blue (EMB) Agar plate ▯ only detect coliforms that are responsible  for gas defects o Selective­differential medium for detection and isolation of gram­negative bacteria o E. Coli – colonies are dark (almost black) – a green sheen can be seen  (precipitation of methylene blue from the high amount of acid produced)  o Enterobacer aerogenes – colonies are less dark (fish­eye colony)  o Incubated at 37⁰C for 24­48h • Malt Extract Agar Plate ▯ molds that cause cheese defects  o Isolation of fungal microorganisms o high content of peptone and is acidic o Incubated at room temperature  for 24­48h Results:  • APT Agar ▯ white growth (blue rods; a lot of them placed together) • EMB Agar ▯  dark black colonies (cocci, attached together) • Malt Extract Agar ▯  fuzzy bacteria; a large yeast also visible; cocci­shaped Microscopic slides formed from methylene blue Experiment 4: Food Illness Caused By Staphylococci and Salomonellae • Enterotoxin▯  toxin that is produced in or affects the intestines  • Endotoxin▯  toxin present inside bacterial cell and released when the cell disintegrates • Exotoxin ▯  toxin released by a living bacterial cell into its surroundings  • Most common forms of food poisoning Caused by enterotoxin­producing strains of   Staphlycoccus aureus   o Enter the food through food­handlers and excrete a HEAT­STABLE exotoxin into  the food product ▯ food poisoning or intoxication  o Food poisoning▯ toxin forming bacteria that enters gastrointestinal tracts o Intoxication ▯ exotoxin producing bacteria that affect the intestines (exotoxin is  produced during bacterial growth in food and is heat stable)  Salmonella sp.  o Food infection ▯ bacteria is consumed and is able to colonize the intestinal tract of  host, grow and cause tissue damage o produces the endotoxin (lipopolysaccharide associated with outer membrane)   Released when the cell disintegrates • Only a small numbers of Salmonella are found in a food product o An enrichment step is necessary • Large numbers of Staphyloccoci are required to cause food poisoning o Quantization is necessary Materials and Method:  Detection of Staphylococcus aureus Staphylococcus Agar Plate   Serial dilutions done to quantize the number of cells   Highly selective and differential medium for Staphylococcus – contains mannitol  and gelatin ▯ staphylococcus degrade these materials  smooth margin and white to golden yellow pigmentation   Incubated at 37⁰C for 48h Brain Heart Infusion Broth   Cultivation of fastidious organisms – allows for excellent growth of Staphylococci   Incubated at 37⁰C for 24h  Coagulase Test  There is a strong correlation between strains that produce the enzyme coagulase and  producing exotoxin  Positive Result ▯ positive for  Staphylococcus aureus  Fibrin­clotting enzyme, coagulase increases toxicity – acts as protection from the host  Detection of Salmonella  Selenite­Cystine Broth   Nurtures stressed cells  Incubated at 37⁰C for 48h  MacConkey Agar Plate  Selective for gram­negative bacteria   Salmonella grows as light pink to colourless colonies because they do not ferment lactose  Incubated at 37⁰C for 48h Triple Sugar Slant  Lactose and Sucrose Utilization ▯ should be negative for  Salmonella o Positive: yellow slant (acid is produced) o Negative: slant becomes intensely red (Acid not produced)  Dextrose Utlization (Glucose) ▯ should be positive for  Salmonella o Positive: yellow butt (if black ▯ dextrose utilization must have occurred) o Negative: colour of butt remains unchanged  H 2 production ▯ Should be positive for  Salmonella o Positive: blackening of the butt o Negative: No blackening  Gas Formation ▯ Should be positive for  Salmonella  o Positive ▯ formation of gas bubbles (CO 2production)  o Negative ▯ no gas pockets  Experiment 5: Determination of Coliforms in Water By The Most Probable Number  Method (MPN Test)  Natural waters contain large numbers and a wide variety of microorganisms   Water still safe to drink  Sanitary quality is determined by kinds of microorganisms ▯ human pathogens are absent    Many pathogens are of fecal origin ▯ detected by bacteriological test designed to locate  organisms native to intestinal tracts o Coliform Bacteria – sewage contains them in large numbers  Not always pathogenic  o Detected more easily and quickly  o Detection only indicates presence of fecal matter, not of pathogens  Presumptive Test  • inoculating a known amount of water sample into durham lauryl tryptose broth tubes  • Selective for coliforms  o If it is fermented with production of gas within 24­48h incubated at 37⁰C  Ł presence of fecal matter and unsafe to drink  o Can also be caused due to Clostridium or Bacillus Confirmed Test One way:  • The positive tubes from presumptive test are chose and loopful from each tube is  inoculated in brilliant green lactose bile broth  • A medium even more selective for coliform detection  o Incubated at at 37⁰C for 48h incubated  o If tube shows gas production Ł confirmed test is positive  Second Way:  • Streak culture from tubes of lauryl tryptose onto EMB Agar Plate  • If you get green metallic sheen (E. Coli) or fish­eyed pink colonies (E. aurogenes) Ł Confirmed test is positive ▯ presence of coliforms Completed Test • Select a well­isolated typical coliform colony and inoculate it into a lauryl tryptose broth o Incubated at at 37⁰C for 24h o  A Gram­stained slide is prepared  If organisms are Gram­negative, nonsporeforming bacilli, and produce gas  and acid from lactose Ł coliforms are present and completed test is positive Most Probable Number – Combinations of positive and negative results from three 10mL  portion, three 1.0mL portions and three 0.1mL portions are used ▯ MPN Index Experiment 6: Determination of Coliform Numbers In Water By The Membrane Filter  Technique • Tap water treated properly is free of coliform (the same does not go for raw or untreated) • Purpose: isolate and grow coliforms from a selected water source by trapping them on  the surface of a membrane filter for culturing into identifiable colonies • Coliform ▯ break down lactose and form aldehydes • Endo Medium : selective for coliforms ▯ discourages the growth of most other species of  bacteria – helps with this test because there are so many other microorganisms found in  water that have nothing to do with pollution  o Contains lactose – coliform can ferment this molecule o Contains basic fuchsin – a stain that reacts with aldehydes to produce a metallic  green sheen ▯ this is distinctive of coliform bacteria • Total Coliforms ▯  organisms that ferment lactose with production of acid and gas within  48h at 35⁰C or produce green metallic sheen on endo agar when incubated at 35⁰C for  24h o Can be isolated fromother sources other than fecal matter • Fecal Coliforms ▯  coliform organisms able to grow and ferment lactose with production  of acid and gas or produce blue colonies on m­FC broth incubated at 44.5⁰C for 24h o Consider this population as more indicative of fecal pollution  Membrane Filter Method (Compared to the multiple tube test):  Advantages: • Greater sensitivity because larger volumes can be tested  • Higher degree of reproducibility • Shorter time for obtaining results Disadvantage: • Water should be free of extraneous matter or it will clog the filter • The membrane filter from the vacuum is transferred to the agar mediums (their respective  ones with the grids side up.  Should have more total coliforms than fecal coliforms Experiment 7: Comparison of Colony Appearance of Coliforms and Other Bacteria Grown  on EMB and ENDO Agars EMB Agar: Selective­differential medium for isolation and differentiation of gram­negative  bacteria • Lactose fermenters: fish­eyed colonies • Lactose non­fermenters: colourless • E. coli: metallic green sheen  ENDO Agar: Selective­differential medium for isolation and differentiation of gram­negative  • Lactose fermenters: red • Lactose non­fermenters: colourless EMB Agar ENDO Agar Nutrient Agar Escherichia coli: ++ metallic green sheen ++ metallic green sheen ++ Salmonella  + colourless + colourless + typhimurium: Pseudomonas  + colourless + colourless + fluorescent green aeruginosa: Citrobacter  ++ metallic green sheen ++ dark green metallic  + freundii: sheen Bacillus subtilis: ­ traces ­ + irregular margin Staphylococcus  ­ ­ + yellow aureus:  Coliform bacteria are Gram­negative bacteria that can ferment lactose with production of acid  or gas when incubated at 35­37.  E. coli can grow on m­FC broth at 44.5 and is usually of fecal origin ▯ positive fecal coliform  test Experiment 8: The IMViC Test • Developed as a means of separating the various types of coliform organisms Indole Test:  • Tryptone broth (rich in amino acid, tryptophan)  • Differentiates the organisms that can separate indole ring from the amino acid and those  that can’t o Organisms that can differentiate contain tryptophanase ▯ catalyzes the hydrolysis  of tryptophan to its metabolic products (indole, pyruvic acid, and ammonia) o Indole accumulates within the media (not used by the organism) o Detected by Krovac’s reagent ▯ forms red complex with indole • Positive: If red layer forms at the top Methyl Red Test:  • Detects glucose fermentation  • The MRVP (methyl­red and voges­proskauer broth) ▯ contains peptone and a small  amount of glucose • E. Coli ▯ ferment glucose to acidic products Łself­limiting condition (pH 4.4)   if present = acidic environment  • Other bacteria do not produce as much as and begin to break done peptone releasing  basic products   if present = basic environment • Use methyl­red indicator  • Positive: If solution becomes red (pH is below 4.4) Voges­Proskauer Test: • Detect acetylmethylcarbinol (acetoine) from sugar fermentation  • Use MRVP broth • Add 6 drops of % alphanaphthol and 3 drops of 40% KOH • Shake tube vigorously • Positive: development of a cherry red colour • Negative: brown colour develops The Citrate Test:  • Simmon’s C
More Less

Related notes for PSYCH 101

Log In


OR

Join OneClass

Access over 10 million pages of study
documents for 1.3 million courses.

Sign up

Join to view


OR

By registering, I agree to the Terms and Privacy Policies
Already have an account?
Just a few more details

So we can recommend you notes for your school.

Reset Password

Please enter below the email address you registered with and we will send you a link to reset your password.

Add your courses

Get notes from the top students in your class.


Submit