Study Guides (248,412)
Canada (121,517)
Psychology (623)
PSYCH 101 (177)
n.a (8)

Biology 241 Lab Exam Notes.docx

19 Pages
Unlock Document


Experiment 1: Direct Microscopic Count of Mircroorganisms in Milk • Different kinds of microorganisms present in milk (depending on source and  circumstances) • Gram­positive, nonmotile, microaerophilic, or anaerobic rods and cones • Lactobacillus, Micrococcus, and Streptococcus • Advantages of Microscopic Count:  o Results are readily available o Individual bacteria and clumps can be counted o Minimum of equipment is required o Morphology of bacteria can be detected o Slides can be kept as permanent record • Disadvantages of Microscopic Count: o Cannot differentiate between alive and dead bacteria o Count not accurate on low­count milk o Tiring o Cells difficult to discern, extraneous material (debris) may cause confusion Methods and Materials • Used raw milk (unpasteurized), pasteurized milk, pasteurized milk after best before date o Most microorganisms will most likely be found in the last one (raw milk is fairly  clean) • Vortex: to evenly mix the samples • Steam­fix: dry the slide over the beaker of boiling water • SlideBrite: removes the fat globules • Warm water removes ethanol, ethanol removes the SlideBrite • Stain with methyl blue, decolorize with ethanol, stop decolorization with water Microscope Factor (MF) • Measure the diameter (0.01mm) = each small space • Diameter/2 = radius • Use formula Area of Field = (pie)(r) 2 • Convert to centimetres = /100 • Number of fields in 1cm = 1cm  / area of field in cm 2 • Microscope Factor = Number of fields/0.005ml/cm Microorganisms only found in past­date pasteurized Experiment 2: Standard Plate Count of Milk • Agar­plate method for estimated bacterial populations • Official method for determining the sanitary quality of milk – most widely used • Serial dilutions of sample is prepared and are either o spread over surface of an agar growth medium: spread­plate technique o mixed with molten­agar growth medium: pour­plate technique • Colony = arisen from the multiplication of an individual bacterial cell fixed in place in  medium  • Total number of colonies formed is equivalent to number of viable microorganisms • Number of bacteria in original sample can be determined by counting # of colonies and  accounting for dilution factor obtained which will produce separate and distinct colonies  for counting • Advantages o it counts only viable microorganisms o accurate for use with milk having a low bacterial count • Disadvantages o detects only organisms capable of utilizing particular nutrients supplied o colonies that are derived can be from a single cell or clumps of cells • Only provides an estimate of total population present in the sample Materials and Method: ­2 • 1.0mL of sample A into 99mL of water = 10  dilution  • 1.0mL of 10 into 99mL sample = 10 dilution • 0.1mL of 10 into petri dish  • Incubated at 37⁰C for 48h Results: • Use Quebec colony counter (bottom of plate facing you)  • Standard Plate Count: plates that yield a colony count between 25­250 • Number of microorganisms per mL of sample = (# of colonies) x (inverse of dilution) =  CFU/mL) More colonies were found in the sample of raw milk than in pasteurized milk  Experiment 3: Microbiological Analysis of Cheese • Cheese is the result of metabolic activity of microorganisms • Lactic acid­producing bacteria (Streptococcus and Lactobacillus) initiate the process o The organic acids produced (lactic acid) is responsible for acidification of the  milk • Other microorganism added ▯ their enzymes cause protein molecules to separate from   mixture (curd) – the curd becomes cheese after some further processing • Three kinds of cheeses:  o Soft ▯ acid­curd cheeses o Hard ▯ rennet­curd cheeses o Semisoft ▯ rennet­curd cheeses • Defect:  o formation of gas due to the presence of gas­producing organisms such as  Clostridium and/or coliform bacteria such as Eshcerichia coli and  Enterobacter aerogenes  o Spoilage : due to dairy mold (Geotrichum, Cladosporium, Penicillium • Purpose: To numerate and differentiate microorgansims found in cheese that cause  spoilage Materials and Method:  • Used alcohol flamed forceps  • 1mL of cheese sample placed in 99mL of water and sterile sand = 10  dilution  ­2 ­4 • 0.1mL of 10  dilution into 9.9mL will give you a 10  dilution  • All Purpose Tween Agar  (APT) ▯ permits the growth of “lactic acid”  o Streptococcus and Lactobacillus o Non­selective  o Incubated at 30⁰C for 24­48h • Eosin Methylene Blue (EMB) Agar plate ▯ only detect coliforms that are responsible  for gas defects o Selective­differential medium for detection and isolation of gram­negative bacteria o E. Coli – colonies are dark (almost black) – a green sheen can be seen  (precipitation of methylene blue from the high amount of acid produced)  o Enterobacer aerogenes – colonies are less dark (fish­eye colony)  o Incubated at 37⁰C for 24­48h • Malt Extract Agar Plate ▯ molds that cause cheese defects  o Isolation of fungal microorganisms o high content of peptone and is acidic o Incubated at room temperature  for 24­48h Results:  • APT Agar ▯ white growth (blue rods; a lot of them placed together) • EMB Agar ▯  dark black colonies (cocci, attached together) • Malt Extract Agar ▯  fuzzy bacteria; a large yeast also visible; cocci­shaped Microscopic slides formed from methylene blue Experiment 4: Food Illness Caused By Staphylococci and Salomonellae • Enterotoxin▯  toxin that is produced in or affects the intestines  • Endotoxin▯  toxin present inside bacterial cell and released when the cell disintegrates • Exotoxin ▯  toxin released by a living bacterial cell into its surroundings  • Most common forms of food poisoning Caused by enterotoxin­producing strains of   Staphlycoccus aureus   o Enter the food through food­handlers and excrete a HEAT­STABLE exotoxin into  the food product ▯ food poisoning or intoxication  o Food poisoning▯ toxin forming bacteria that enters gastrointestinal tracts o Intoxication ▯ exotoxin producing bacteria that affect the intestines (exotoxin is  produced during bacterial growth in food and is heat stable)  Salmonella sp.  o Food infection ▯ bacteria is consumed and is able to colonize the intestinal tract of  host, grow and cause tissue damage o produces the endotoxin (lipopolysaccharide associated with outer membrane)   Released when the cell disintegrates • Only a small numbers of Salmonella are found in a food product o An enrichment step is necessary • Large numbers of Staphyloccoci are required to cause food poisoning o Quantization is necessary Materials and Method:  Detection of Staphylococcus aureus Staphylococcus Agar Plate   Serial dilutions done to quantize the number of cells   Highly selective and differential medium for Staphylococcus – contains mannitol  and gelatin ▯ staphylococcus degrade these materials  smooth margin and white to golden yellow pigmentation   Incubated at 37⁰C for 48h Brain Heart Infusion Broth   Cultivation of fastidious organisms – allows for excellent growth of Staphylococci   Incubated at 37⁰C for 24h  Coagulase Test  There is a strong correlation between strains that produce the enzyme coagulase and  producing exotoxin  Positive Result ▯ positive for  Staphylococcus aureus  Fibrin­clotting enzyme, coagulase increases toxicity – acts as protection from the host  Detection of Salmonella  Selenite­Cystine Broth   Nurtures stressed cells  Incubated at 37⁰C for 48h  MacConkey Agar Plate  Selective for gram­negative bacteria   Salmonella grows as light pink to colourless colonies because they do not ferment lactose  Incubated at 37⁰C for 48h Triple Sugar Slant  Lactose and Sucrose Utilization ▯ should be negative for  Salmonella o Positive: yellow slant (acid is produced) o Negative: slant becomes intensely red (Acid not produced)  Dextrose Utlization (Glucose) ▯ should be positive for  Salmonella o Positive: yellow butt (if black ▯ dextrose utilization must have occurred) o Negative: colour of butt remains unchanged  H 2 production ▯ Should be positive for  Salmonella o Positive: blackening of the butt o Negative: No blackening  Gas Formation ▯ Should be positive for  Salmonella  o Positive ▯ formation of gas bubbles (CO 2production)  o Negative ▯ no gas pockets  Experiment 5: Determination of Coliforms in Water By The Most Probable Number  Method (MPN Test)  Natural waters contain large numbers and a wide variety of microorganisms   Water still safe to drink  Sanitary quality is determined by kinds of microorganisms ▯ human pathogens are absent    Many pathogens are of fecal origin ▯ detected by bacteriological test designed to locate  organisms native to intestinal tracts o Coliform Bacteria – sewage contains them in large numbers  Not always pathogenic  o Detected more easily and quickly  o Detection only indicates presence of fecal matter, not of pathogens  Presumptive Test  • inoculating a known amount of water sample into durham lauryl tryptose broth tubes  • Selective for coliforms  o If it is fermented with production of gas within 24­48h incubated at 37⁰C  Ł presence of fecal matter and unsafe to drink  o Can also be caused due to Clostridium or Bacillus Confirmed Test One way:  • The positive tubes from presumptive test are chose and loopful from each tube is  inoculated in brilliant green lactose bile broth  • A medium even more selective for coliform detection  o Incubated at at 37⁰C for 48h incubated  o If tube shows gas production Ł confirmed test is positive  Second Way:  • Streak culture from tubes of lauryl tryptose onto EMB Agar Plate  • If you get green metallic sheen (E. Coli) or fish­eyed pink colonies (E. aurogenes) Ł Confirmed test is positive ▯ presence of coliforms Completed Test • Select a well­isolated typical coliform colony and inoculate it into a lauryl tryptose broth o Incubated at at 37⁰C for 24h o  A Gram­stained slide is prepared  If organisms are Gram­negative, nonsporeforming bacilli, and produce gas  and acid from lactose Ł coliforms are present and completed test is positive Most Probable Number – Combinations of positive and negative results from three 10mL  portion, three 1.0mL portions and three 0.1mL portions are used ▯ MPN Index Experiment 6: Determination of Coliform Numbers In Water By The Membrane Filter  Technique • Tap water treated properly is free of coliform (the same does not go for raw or untreated) • Purpose: isolate and grow coliforms from a selected water source by trapping them on  the surface of a membrane filter for culturing into identifiable colonies • Coliform ▯ break down lactose and form aldehydes • Endo Medium : selective for coliforms ▯ discourages the growth of most other species of  bacteria – helps with this test because there are so many other microorganisms found in  water that have nothing to do with pollution  o Contains lactose – coliform can ferment this molecule o Contains basic fuchsin – a stain that reacts with aldehydes to produce a metallic  green sheen ▯ this is distinctive of coliform bacteria • Total Coliforms ▯  organisms that ferment lactose with production of acid and gas within  48h at 35⁰C or produce green metallic sheen on endo agar when incubated at 35⁰C for  24h o Can be isolated fromother sources other than fecal matter • Fecal Coliforms ▯  coliform organisms able to grow and ferment lactose with production  of acid and gas or produce blue colonies on m­FC broth incubated at 44.5⁰C for 24h o Consider this population as more indicative of fecal pollution  Membrane Filter Method (Compared to the multiple tube test):  Advantages: • Greater sensitivity because larger volumes can be tested  • Higher degree of reproducibility • Shorter time for obtaining results Disadvantage: • Water should be free of extraneous matter or it will clog the filter • The membrane filter from the vacuum is transferred to the agar mediums (their respective  ones with the grids side up.  Should have more total coliforms than fecal coliforms Experiment 7: Comparison of Colony Appearance of Coliforms and Other Bacteria Grown  on EMB and ENDO Agars EMB Agar: Selective­differential medium for isolation and differentiation of gram­negative  bacteria • Lactose fermenters: fish­eyed colonies • Lactose non­fermenters: colourless • E. coli: metallic green sheen  ENDO Agar: Selective­differential medium for isolation and differentiation of gram­negative  • Lactose fermenters: red • Lactose non­fermenters: colourless EMB Agar ENDO Agar Nutrient Agar Escherichia coli: ++ metallic green sheen ++ metallic green sheen ++ Salmonella  + colourless + colourless + typhimurium: Pseudomonas  + colourless + colourless + fluorescent green aeruginosa: Citrobacter  ++ metallic green sheen ++ dark green metallic  + freundii: sheen Bacillus subtilis: ­ traces ­ + irregular margin Staphylococcus  ­ ­ + yellow aureus:  Coliform bacteria are Gram­negative bacteria that can ferment lactose with production of acid  or gas when incubated at 35­37.  E. coli can grow on m­FC broth at 44.5 and is usually of fecal origin ▯ positive fecal coliform  test Experiment 8: The IMViC Test • Developed as a means of separating the various types of coliform organisms Indole Test:  • Tryptone broth (rich in amino acid, tryptophan)  • Differentiates the organisms that can separate indole ring from the amino acid and those  that can’t o Organisms that can differentiate contain tryptophanase ▯ catalyzes the hydrolysis  of tryptophan to its metabolic products (indole, pyruvic acid, and ammonia) o Indole accumulates within the media (not used by the organism) o Detected by Krovac’s reagent ▯ forms red complex with indole • Positive: If red layer forms at the top Methyl Red Test:  • Detects glucose fermentation  • The MRVP (methyl­red and voges­proskauer broth) ▯ contains peptone and a small  amount of glucose • E. Coli ▯ ferment glucose to acidic products Łself­limiting condition (pH 4.4)   if present = acidic environment  • Other bacteria do not produce as much as and begin to break done peptone releasing  basic products   if present = basic environment • Use methyl­red indicator  • Positive: If solution becomes red (pH is below 4.4) Voges­Proskauer Test: • Detect acetylmethylcarbinol (acetoine) from sugar fermentation  • Use MRVP broth • Add 6 drops of % alphanaphthol and 3 drops of 40% KOH • Shake tube vigorously • Positive: development of a cherry red colour • Negative: brown colour develops The Citrate Test:  • Simmon’s C
More Less

Related notes for PSYCH 101

Log In


Join OneClass

Access over 10 million pages of study
documents for 1.3 million courses.

Sign up

Join to view


By registering, I agree to the Terms and Privacy Policies
Already have an account?
Just a few more details

So we can recommend you notes for your school.

Reset Password

Please enter below the email address you registered with and we will send you a link to reset your password.

Add your courses

Get notes from the top students in your class.